Apoptosis

Detección de la muerte celular programada o apoptosis mediante citometría de flujo.

  • Ensayos altamente sensibles para detectar las etapas apoptóticas tempranas y tardías.

  • Gran número de ensayos para detectar diferentes parámetros.

  • Validado por citometría de flujo con muchos tipos de células diferentes

  • Validado con muchos tipos de medicamentos diferentes.

  • Diferentes opciones de fluorescencia para múltiples fuentes de excitación láser.

Detección de células apoptóticas: Aplicación diagnóstica

La apoptosis es un proceso regulado de muerte celular que se produce durante el desarrollo embrionario y el mantenimiento de la homeostasis de los tejidos. La aparición de la apoptosis no regulada implica la posibilidad de diferentes enfermedades, como las neurodegenerativas y el cáncer.

Enfermedades neurológicas

Investigación del Cáncer

Viabilidad del esperma

Desarrollo de medicamentos

La comprensión de los mecanismos de la muerte celular programada o apoptosis, es un aspecto importante en la investigación de, por ejemplo, la homeostasis de los tejidos, las enfermedades tumorales o la toxicidad y eficacia de los fármacos, entre otros.

¿Por qué se utiliza la tinción con anexina V para detectar la apoptosis?

El anticoagulante vascular humano, la anexina V, es una proteína de unión a fosfolípidos dependiente del Ca2+ de 35-36KDa que tiene una alta afinidad por la PS. En las células sanas, la PS se localiza en la superficie citoplasmática de la membrana plasmática.

Sin embargo, durante la apoptosis temprana, la fosfatidilserina (PS), normalmente localizada en la superficie citoplasmática de la membrana celular, queda expuesta al entorno extracelular, provocando cambios en la asimetría y permeabilidad de la membrana.

Alta sensibilidad detectando etapas apoptóticas tempranas y tardías

Los ensayos de membrana de Immunostep se basan en la detección combinada de apoptosis y necrosis mediante la doble tinción vital fluorescente con Annexin V y PI o 7-AAD. La anexina V se une a la fosfatidilserina que se transloca fuera de la membrana durante la apoptosis, mientras que el PI o el 7-AAD sólo pueden penetrar en las células necróticas.

Detección de apoptosis mediante citometría de flujo

El análisis por citometría de flujo de la apoptosis se basa en diferentes principios de detección. Debido a la complejidad de las cascadas de muerte celular, los kits multiparamétricos de Immunostep son especialmente idóneos para evaluar la apoptosis.

Figure 2: Mitochondrial cationic Dye process Illustration

Ensayos mitocondriales: detección de células apoptóticas tempranas.

La disfunción de las mitocondrias es una característica especial de las primeras etapas de la apoptosis. Los kits de apoptosis MitoStep miden los cambios en el potencial de la membrana mitocondrial con una solución del colorante catiónico de cianina DiIC1(5).

En las células sanas, especialmente en las mitocondrias con potenciales de membrana activos, el colorante se acumula. Durante la apoptosis, la intensidad de la fluorescencia de DiIC1(5) disminuye y, por lo tanto, hay un aumento de células con menor fluorescencia de DiIC1(5). 

MitoStep Kits:

Se ha descrito la despolarización de la submitocondria y, por tanto, los cambios en la membrana mitocondrial durante las primeras fases de la apoptosis. Esta es la razón por la que la captación mitocondrial de los colorantes catiónicos es una posible fuente de variación de la fluorescencia.

Las células teñidas con DiIC1(5) pueden visualizarse mediante la excitación con un láser de 633 nm y la emisión a 658 nm, y pueden combinarse con la tinción con FITC o PE.

Figure 3: Jurkat Cells T/cell Leukemia, human (treated with 6um Camptothecin for four hours/both panel.

Referencias de producto
ANXVKF-100T

FITC-Fluorescein isothiocyanate (Blue Laser) | More info

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ANXVKPE-100T

PE- R-Phycoerythrin (Blue Laser) | More Info

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ANXVKDY-100T

Dy634- Dyomics 634 (Red Laser) | More info

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ANEXVKCFB-100T

CF-blue – CF405M (Violet Laser) |More info

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ANEXVKCFB-200T

CF-blue – CF405M (Violet Laser) |More info

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MITO-100T

MitoStep | DilC1(5), 500 ulof10uM in DMSO | More info

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KMAF-100T

MitoStep + FITC Apoptosis detection kit | DilC1(5), 500 ulof10uM in DMSO, ANXVKF-FITC Apoptosis Detection Kit | More info

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KMAPE-100T

MitoStep + PE Apoptosis Detection Kit | DilC1(5), 500 ulof10uM in DMSO, ANXVKPE Apoptosis detection Kit | More info

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